|
Независимо от конкретния случай, регистрацията на АТФазната реакция се свежда до определянето на концентрацията на неорганичния фосфат в определен обем разтвор. Известни са различни методи за определяне регистрацията на неорганичен фосфат, но във всички случаи се използва реакция, водеща до образуване на оцветен продукт, концентрацията на който се определя чрез измерване на екстенцията.
Пробите се подготвят, като разтворите се добавят в указанияопределен ред. След внасяне на изследвания разтвор, съдържащ Ф, пробите се инкубират в продължение на 30 мин при стайна температура, след което се измерва екстинцията при дължина на вълната 750 нмнанометра. Концентрацията на неорганичен фосфат се определя по екситнцията на стандартната проба, или по-добре, по предварително построена стандартна крива. Стандартната крива се построява като в пробите се внася от 0,01 до 0,1 М разтвор на ▼По-долу е описан частично модифициран метод за определяне на концентрацията на неорганичен фосфат по Фиске и Субороу.
Необходими реактиви и разтвори:
* Разтвор А – 1,65 г. амониев хептамолибдат 25 мл 3,75 М 60 мл
Разтвор А може да се подготви предварително и може да се съхранява продължително време.
* Разтвор В – 1,5 г. 0,3 мл 3,75 М 25 мл
Разтвор В се приготвя непосредствено преди определянето в необходимото количество и не може да се съхранява продължително време.
* Стандартен разтвор 1 М.
Пробата за определяне концентрацията на неорганичен фосфат съдържа:
* Проба 0,4 мл, разтвор А 0,2 мл, разтвор В 0,5 мл от изследвания разтвор. За определяне на концентрацията се приготвя стандартна проба, съдържаща определен обем (1 М) на неорганичен фосфат.
* Стандартен разтвор 0,4 мл, разтвор А 0,2 мл, разтвор В 0,5 мл. За измерване на екстинцията се приготвя контролна проба, несъдържаща неорганичен фосфат.
* Контрола 0,4 мл, разтвор А 0,2 мл, разтвор В 0,5 мл.
▲Пробите се подготвят, като разтворите се добавят в указания ред. След внасяне на изследвания разтвор, съдържащ Ф, пробите се инкубират в продължение на 30 мин при стайна температура, след което се измерва екстинцията при дължина на вълната 750 нм. Концентрацията на неорганичен фосфат се определя по екситнцията на стандартната проба, или по-добре, по предварително построена стандартна крива. Стандартната крива се построява като в пробите се внася от 0,01 до 0,1 М разтвор на
(от 0,01 до 0,1 М фосфат в проба).
| 